Anti-AAV Antibodies 제품을 소개합니다.

아데노연관바이러스(AAV)는 유전자 치료에 널리 사용되는 DNA 전달 벡터입니다. AAV 혈청형(serotype)에 따라 특정 조직이나 장기를 표적으로 하며, 그중 AAV2, AAV8, AAV9가 가장 일반적으로 사용됩니다. GenScript의 Anti-AAV antibody 시리즈는 바이러스 발현 수준 평가, 바이러스 물리적 역가(physical titer) 정량화, AAV 캡시드 단백질 식별 및 바이러스 면역원성 분석(immunogenicity)을 가능하게 합니다.

[Product Highlights]

[Selection Guide]

GenScript는 두 종류의 AAV antibody를 제공합니다. 한 종류는 특정 혈청형의 조립된 캡시드(assembled capsid)의 구조적 에피토프(conformational epitope)를 인식합니다. 이 항체는 AAV 역가를 정량화하는 Sandwich ELISA 분석이나 바이러스 발현 수준을 신속하게 평가하는 Dot Blot 분석에 적합합니다.

GenScript는 연구를 더욱 쉽게 진행할 수 있도록 바로 사용할 수 있는 antibody pair를 개발했습니다.

다른 유형의 AAV antibody는 AAV 캡시드 단백질인 VP1, VP2, VP3의 선형 에피토프(linear epitopes)를 인식합니다. 이 항체는 Western Blot 분석에 적합하며, AAV 생산 과정에서 VP1/VP2/VP3의 발현 수준을 평가하거나 AAV 생산 및 정제 과정에서 캡시드 단백질의 존재 여부를 확인하는 데 사용할 수 있습니다.

[Application]

• Capsid proteins VP1, VP2, and VP3 characterization

AAV capsid는 총 60개의 바이러스 단백질(VP) 분자로 구성됩니다. 이 단백질들은 VP1, VP2, VP3의 세 가지로 이루어져 있으며, 이들의 비율은 1:1:10입니다. VP1, VP2, VP3의 겉보기 분자량은 각각 87 kDa, 73 kDa, 62 kDa입니다. Capsid protein은 세포 전달 효율에 매우 중요합니다. VP2와 VP3의 양이 부족하면 효율적인 패키징이 이루어지지 않는 주요 원인으로 여겨지며, VP3가 과다하게 존재하면 전달 효율이 저하될 수 있습니다. 따라서 세 가지 capsid protein의 비율을 최적화하는 것은 AAV 생산 공정에서 매우 중요합니다. Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)과 Western blot (WB)은 recombinant AAV 생산 공정의 초기 최적화 및 품질 관리 단계에서 VP1, VP2, VP3 단백질의 구성을 확인하는 데 효과적인 방법입니다. GenScript는 capsid protein VP1, VP2 및 VP3의 특성 분석을 위한 Anti-AAV Antibody를 제공합니다(그림 1 및 2).

Figure 1. VP1, VP2, VP3 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot

Western blot analysis of VP1, VP2, VP3 proteins of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab™ AAVX VP1/VP2/VP3 Antibody (5G4), mAb, Rabbit (GenScript, A02206, 0.1 µg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG. 

Predicted Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa
Observed Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa

Figure 2. VP1 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot

Western blot analysis of VP1 protein of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab™ AAVX VP1 Antibody (24F5), mAb, Rabbit (GenScript, A02207, 0.1 µg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG.

Predicted Size : 87 kDa
Observed Size : 87 kDa

• Physical titer quantitation

HEK293 세포와 결합된 3개의 플라스미드 시스템은 recombinant AAV(rAAV)를 생성하는 일반적인 방법입니다. Virus particle titer (physical titer) 측정은 rAAV 생산 과정에서 중요하며, AAV antibody를 이용한 AAV titer quantitation 원리는 아래와 같습니다(그림 3). AAV monoclonal antibody는 rAAV physical titer를 측정하기 위한 면역 분석법 준비에 사용됩니다. GenScript는 AAV physical titer 정량을 위한 다양한 Anti-AAV antibody를 제공합니다(그림 4 및 5).

Figure 3. Principle of AAV titer quantitation with AAV antibody

Figure 4. Standard Curve of AAV2 Capsids by Sandwich ELISA

The Sandwich ELISA assay was developed by Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4), mAb, Mouse (GenScript, A02159-40; 2 μg/mL) and Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4) [Biotin], mAb, Mouse (GenScript, A02160-40; 2 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

Figure 5. Standard curve of AAV8 by Sandwich ELISA

The AAV8 Sandwich ELISA assay was developed by using MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204; 2.5 μg/mL) and MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (72E8), mAb, Rabbit (GenScript, A02205; 1 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

• Immunogenicity assay

유전자 조작 치료를 받는 환자의 경우, 체내에 이미 존재하는 AAV 항체가 안전상의 위험을 초래할 수 있습니다. 환자의 기존 AAV 항체는 자연 감염뿐만 아니라 AAV 벡터 투여에 의해서도 발생할 수 있습니다. 따라서 recombinant AAV(rAAV) 제품의 immunogenicity를 철저히 규명하고 감소시키는 것이 필수적입니다. Anti-drug antibody(ADA) 검사는 기존 AAV 항체를 측정하는 데 중요한 도구이며, 그림 6에는 한 가지 anti-AAV antibody 검사 형식이 설명되어 있습니다. Anti-AAV Antibody는 ADA 검사에서 양성 대조군으로 사용하거나 표준 곡선을 작성하는 데 사용할 수 있습니다(그림 7 및 8).

Figure 6. Anti-AAV antibody assay format

Figure 7. Standard Curve of AAV2 Capsids by Indirect ELISA

ELISA binding of MonoRab™ AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) with AAV2. Coating antigen: AAV2, 1 µg/mL. MonoRab™ AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) dilution start from 1,000 ng/mL.

Figure 8. Standard Curve of AAV8 Capsids by Indirect ELISA

 ELISA binding of MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) with AAV type 8. Coating antigen: AAV type 8, 1 µg/mL. MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) dilution start from 1,000 ng/mL